清热解毒类中药拮抗细菌内毒素作用研究

摘要：细菌内毒素是机体致病的重要毒力因子，抗生素亦可诱导细菌释放内毒素，目前防治内毒素损伤的方法和途径多种多样，但尚无一种非常**的手段。而作为天然物品的中药，有很多种类可以抗内毒素损伤。本文从细菌内毒素的产生及危害角度出发，重点阐述清热解毒类中药在拮抗细菌内毒素方面的应用，从而为临床选用抗内毒素中药提供参考。
　　关键词：清热解毒；中药；拮抗；细菌内毒素
　　生产实践中许多人认为细菌病可用抗菌素治疗，只要通过药敏试验筛选出敏感药物，**产生理想疗效，其实并非如此。因为多种因素会导致药敏结果与实际效果不一致，如药物剂量、用法、血清型等，但细菌内毒素产生的影响却未见报道。细菌内毒素在人医上研究较多，但在临床很少有人去考虑抗生素诱导细菌释放内毒素，以及某些革兰氏阴性菌会产生内毒素的问题，以致治疗效果差。虽然现在防治内毒素损伤的方法和途径多种多样，如LPS抗体、细菌通透性增加蛋白、细胞因子拮抗剂、抗内毒素蛋白、溶菌酶等[1]，但尚无一种非常**的手段。而作为天然物品的中药，有很多种类可以抗内毒素损伤，目前经实验证实有较好抗内毒素作用的中药多集中在清热解毒、益气、活血化瘀、温阳、滋阴类药中，并且具有低毒低副作用等优点，已成为研究抗内毒素治疗药物的热点和重要方向。
　　1  细菌内毒素概念
　　细菌内毒素（1ipopolysaccharide，LPS）是与细菌细胞壁牢固结合的一种大分子结构物质．主要存在于革兰氏阴性菌。只有在细菌死亡或繁殖时，才释放到细胞外，发挥其**效应[2]。1993年首先由Boivin等用三氯醋酸由鼠伤寒杆菌中提出，是一种G-菌细胞壁的组成成分，其化学本质为脂多糖(LPS)。LPS是诱发炎症反应过程中主要的致病成分，通过诱导体内单核—巨噬细胞合成并释放多种炎症介质，参与机体的免疫炎症反应，严重时可导致脓毒症或休克[3]。
　　2  细菌内毒素危害
　　革兰氏阴性菌感染的危害性主要源自其释放的内毒素[3]。动物传染病多种细菌皆可产生内毒素，如大肠杆菌（肠毒素、类志贺毒素）、沙门氏菌、巴氏杆菌（DNT）、胸膜肺炎放线杆菌等，它们通过外源性感染和肠道系统内源性转位两种途径进入血液循环导致内毒素血症，是机体致病的重要毒力因子。很多严重疾病[4-5]（如损伤、烧伤、心、肾、消化系统、呼吸系统、肿瘤、自动免疫等方面的疾病)都直接或间接与革兰阴性菌感染及其释放的内毒素有关。
　　2.1  热源反应  具有致热性，可使动物和人发热，体温升高。2μg／kg的剂量就能引起可以检测出的发热反应。
　　2.2  内毒素血症、休克和弥漫性血管内凝血等  LPS进入机体后可先后诱导细胞因子和黏附分子及NO等炎性介质产生和释放，引起内皮细胞的损伤和屏障功能的改变，导致全身性炎症反应综合征和脓毒症，严重者可导致低血压、中毒性休克、弥漫性血管内凝血(DIC)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、多器官功能衰竭(MOF)，甚至死亡。
　　2.3  白细胞数目改变  LPS初期可使血液中白细胞数目急剧下降，数**后骨髓粒细胞又大量释放入血引发白细胞增多症。该过程会导致动物免疫系统紊乱，增加病原体感染几率。
　　此外，内毒素注射入实验动物，常可导致动物死亡。还能导致怀孕动物流产、早产或死胎；抑制红细胞生成；具有致敏和抗敏作用等。
　　3  清热解毒类中药在拮抗细菌内毒素中的应用
　　大量研究表明：抗生素不但不能抑制内毒素的生物学活性，而且在治疗革兰阴性菌感染时会诱导大量内毒素释放[6-10]，使该类疾病治疗的难度增加。因此，拮抗内毒素及阻断或减弱其介质的损伤具有重要临床意义，而传统中医药在此方面具有独特的功效，中医把LPS看成“热毒”、“邪毒”的物质基础，中药抗内毒素的机制，归纳起来主要是清除或灭活内毒素，减弱或消除内毒素诱发的活性因子的损伤及对脏器组织细胞的保护作用。
　　3.1  单味中药  
　　刘志峰等[11]通过鲎试剂定量测定内毒素含量，观察板蓝根、双黄连、清开灵等8种中药注射剂的体外抗内毒素作用，结果显示：双黄连粉针剂、清开灵注射液、板蓝根注射液、穿琥宁注射液和鱼腥草注射液都有**的体外抗内毒素作用，其中双黄连、清开灵和板蓝根的抗内毒素作用最强，稀释2500倍仍能够清除70％以上的内毒素；其次是穿琥宁、鱼腥草和鱼金注射液；复方大青叶注射液和抗腮腺炎注射液的体外抗内毒素作用较弱。王海华等研究也认为鱼腥草注射液和双黄连注射液具有**抗内毒素心肌损伤作用，通过**心肌中NO的量，增强心肌的抗氧化能力，稳定心肌酶活性和能量代谢水平等途径，**心肌对内毒索性损伤的抵抗力。
　　刘萍等[12]研究认为柴胡提取液对大肠杆菌内毒素有破坏作用，但与浓度有关，柴胡提取液在较高浓度（大于25%）时对细菌内毒素有较强破坏作用，但当浓度**（12.5%）时，抗内毒素作用**减弱。且不同产地、来源的柴胡抗内毒素作用存在差异。
　　杨建东等[13] 实验证明大黄可改善内毒素导致的血流动力学紊乱，对内毒素生物学活性有一定的拮抗作用。内毒素性休克大鼠经大黄治疗后血压下降不显著。谢恬对大黄的研究表明，能显著抑制家兔内毒素性发热。陈德昌等[14]也证实，大黄对脓毒症大鼠肝细胞线粒体有**的保护效应，并能显著**肝细胞线粒体内ATP合成及烫伤和内毒素打击后肝细胞线粒体能荷，说明大黄能防止创伤和内毒素“二次打击”后动物肝细胞线粒体内细胞色素C的丢失，维护呼吸链的完整性，**病理状态下肝细胞合成ATP的能力。
　　高淑娟[15]等通过体外鲎试剂基质显色法检测并比较双花、蒲公英、连翘、地丁、败酱草对内毒素的直接作用，结果显示双花、连翘的作用最强。刘晓波等[16]应用产色基质偶氮法对9种单味中草药进行体外拮抗内毒素筛选实验，表明乌梅、连翘、大黄、蛇属子有**拮抗内毒素的功效；肉桂、附子、云苓、阿胶、犀角、水牛角等都有较好的拮抗内毒素效应；黄连能**改善内毒素攻击大鼠的预后。
　　刘庆增等[17]研究表明，人参提取液对内毒素结构的直接破坏作用不**，但对其引发的致热、白细胞骤降及休克死亡有较强的拮抗和防护效果。认为人参抗内毒素作用是“适应原”样中药通过对机体反应的影响、改变机体应激状态，**机体对**有害刺激的防御能力实现的。
　　实验还证实，丹参有减少LPS的作用，其机制可能是直接中和或破坏LPS，且LPS被破坏的量与丹参的量呈正相关。对内毒素引起的犬感染性休克有中和或破坏效果。[18]
　　雷玲等[19]研究表明，赤芍水煎剂及从赤芍水煎液中分离的赤芍总苷于体内、外均表现**的抗内毒素作用，能****内毒素静脉攻击所致小鼠死亡率。赤芍总苷为赤芍主要的抗内毒素**部位，赤芍的挥发性部分及多糖部分未见有**作用。
　　 李敬等[20]研究认为，0.833g·mL-1黄芩苷可使4EU内毒素降解为0.546EU，破坏率为87.45％；0.5％黄芩苷溶液可显著**内毒素引起的家兔体温升高，同等剂量脂多糖引起的小鼠死亡率从70.0％降为10.O％；黄芩中的黄芩苷可抑制脂多糖致小鼠血清中TNF和NO的过度释放，其抑制率呈剂量依赖性。
　　黄显荣[21]通过对金银花、苦参、玄参、黄柏、黄连、黄芩、七叶一枝花、连翘、鱼腥草、生地等10种药特异性鲎试剂进行鲎试验，结果显示：具有抗内毒素作用的药物及浓度分别为：金银花、玄参、苦参、黄柏(5mg/m1)；黄芩、黄连、七叶一枝花(10mg/m1)；连翘、鱼腥草、生地(20mg/m1)。其中金银花、玄参、苦参、黄柏等有较强抗内毒素活性。
　　黄继全、刘云海等体内外实验表明，大青叶有抗大肠杆菌0111B4内毒素作用。其他实验证实，青蒿素、青蒿提取物、黄连素、栀子苷、脱氧胆酸钠、甘氨酸、落新妇根等都有较好的抗内毒索作用。

　　3.2  中药复方

　　3.2.1  黄连解毒汤   由黄连、黄芩、黄柏、栀子等组成，主治热毒壅盛于三焦。是治疗急性感染性疾病的**药物。研究证实，具有较好的抑菌作用和促进网状内皮系统的吞噬功能等多方面作用。戴锡珍等[22]实验证明，黄连解毒汤有较显著的减毒作用，是以破坏降解内毒素形态的直接方式而不是对内毒素活性的暂时性抑制。通过**网状内皮系统的吞噬功能，加速内毒素的廓清来发挥作用，其对细菌毒素的直接中和亦为其主要的作用方式。

　　3.2.2  清瘟败毒饮  由地黄、水牛角、黄连、栀子等组成。具有泻火凉血、清热解毒、杀菌消炎等功效。是治疗**急性感染的良方。谢恬等[23] 采用内毒素诱发家兔温病气血两燔证模型，证明该方对发热具有**抑制作用；能改善家兔注射内毒素后白细胞先降后升的现象，并能拮抗血小板**；拮抗高粘综合征（血瘀），具有解聚、降粘、稀释血液（凉血化瘀）作用；抑制家兔气血两燔证发热效应同时，使血浆中升高的cAMP**，下降的cGMP升高，具有调整cAMP、cGMP比值的作用；还可保护内脏器官、减轻脏器组织病理损害。

　　3.2.3  清开灵注射液  由牛黄、水牛角、板蓝根、金银花等中药制备的复方中药注射剂，具有清热解毒、凉血泻火等功效，临床广泛用于外感高热、瘟毒及肝肾疾病等治疗。刘云海等[24]采用体内、体外实验证实清开灵注射液有抗大肠杆菌内毒素作用，稀释l6倍，仍可使浓度为10EU/mL内毒素破坏至鲎试剂灵敏度以下，表明清开灵注射液对内毒素引起的发热反应有较好的抑制作用。

　　3.2.4  大承气汤  由大黄、厚朴、枳实、芒硝组成。功能峻泻热结、主治阳明腑证。周晓红等[25] 采用静脉注射LPS造成内毒素性休克的大鼠模型观察大承气汤的作用，结果显示可使内毒素休克大鼠的血压**回升，肺动脉压****；减轻主要脏器的损伤，延长存活时间，有逆转内毒素休克并保护机体的作用。

　　3.2.5  热毒清  由重楼、板蓝根、蒲公英、冰片、甘草组成，具有清热解毒，消肿止痛功效。临床用于治疗多种急性感染性疾病**。实验发现有体外抑菌、体内抗感染、抗炎、解热、增强免疫功能等作用。尤其能治革兰氏阴性菌感染，能**实验性伤寒、副伤寒菌苗引起的家兔发热反应。研究者采用内毒素致家兔发热模型观察热毒清注射液对发热的防治作用，结果显示热毒清中、高剂量均有解热作用，低剂量无**解热作用。但热毒清中剂量及高剂量相比较其解热作用无**差异。预防组和治疗组家兔体温上升幅度以及体温反应指数不仅均较模型组极显著或显著减小，而且与阴性对照组无显著差异，结果表明热毒清注射液对内毒素性发热具有确实的预防和治疗作用，并提示与①直接降解内毒素；②增强单核吞噬细胞系统功能；③稳定溶酶体膜等作用有关。且中、高剂量还能显著**发热家兔血清中IL-8水平，参与炎性介质的调节是热毒清口服液治疗作用机制之一。[26--29]

　　3.2.6  热毒平  是通过临床和实验研究筛选出来的治疗高热内毒素血症的新药。邓文龙等[30]研究表明，具有显著的抗内毒素活性，其体外对内毒素灭活作用与多黏菌素B相当，能直接破坏内毒素的超微结构，可****内毒素攻击所致小鼠的存活率，并对放线菌素D、D一氨基半乳糖致敏小鼠内毒素休克有显著的保护作用。

　　3.2.7  金叶败毒冲剂   杨明炜等[31]体外电镜观察金叶败毒冲剂(JY)发现能裂解大肠杆菌O111B4内毒素的网状结构，体内病理检查JY能够减少内毒素性家兔DIC肾小球微血栓的形成，提示该方具有直接降解内毒素和拮抗内毒素致DIC生物效应的作用。

　　3.2.8  连翘败毒片  韩双红等[32]研究表明连翘败毒片可**线粒体中的LPO和ACP浓度，升高SOD活性，对内毒素所致小鼠的死亡有**的保护作用，显著增加小鼠血清HC50含量，并增加小鼠迟发超敏DHC反应、胸腺指数和脾指数。具有**抗内毒素及**机体细胞免疫、体液免疫的作用。

　　3.2.9  凉膈散  余林中等[33]用大肠杆菌内毒素iv复制家兔温病模型，观察凉膈散对模型动物的化瘀作用，结果凉膈散能够抑制内毒素所致家兔血小板计数、凝血酶原时间、血浆蛋白纤维原含量及血流变性的异常改变，并能抑制ADP诱导的正常和模型家兔血小板凝集。

　　3.2.10  其他中药   刘新槐等[34]用清营汤与清热解毒药配伍显示，可以**机体对热毒物质--内毒素的清泄,使炎性物质如PGE2、5-TH释放减少，提示体内炎症反应减弱，内毒素对机体的损伤有所缓解。

　　综上所述，内毒素对动物机体产生的危害是多方面的，消除其产生的影响对于**治疗效果具有重要意义。增强机体自身清除内毒素能力与直接拮抗内毒素毒力相结合是治疗关键，这也正是中医清热解毒法实质—-以全面调动机体抗感染修复能力为主的综合性抗感染原则的体现，欲达到这样的治疗目的，单味药物显得势单力薄，而中药复方则可以通过对内毒素结构的直接破坏使其生物学活性及免疫源性减弱或消失；或通过增强机体免疫吞噬能力来**对内毒素的清除能力；还可以通过加速内毒素的排泄来减轻和防止肠源性内毒素血症；同时通过不同程度地拮抗内毒素及其诱发的活性介质对机体的损伤等多方面作用使治疗效果显著**。因此，开发、研制更具疗效且**可靠的中药复方有着广阔的前景。然而，单用中药治疗危重而复杂的内毒素血症是不够的，而应充分发挥现代医学关于内毒素拮抗性干预和中医药保护性治疗的优势，优势互补，有机结合，这样才能**地防治细菌内毒素及其诱发的一系列严重并发症。