副猪嗜血杆菌的分离培养及敏感药物选择

　在规模化集约化猪场内，副猪嗜血杆菌病时有发生，表现为多发性浆膜炎和关节炎，主要感染断奶前后和保育阶段猪，发病率一般在10%-15%，严重时死亡率可达50%。我们实验室对湖南地区某猪场疑似病例进行了病原的分离鉴定和药敏试验，得到良好的治疗效果。现将结果报告如下：

一、材料

　　1、病料：在无菌操作条件下取疑似病猪的肺脏、胸膜、胸腹腔积水、心包积液、心血、关节液等。

　　2、培养基：巧克力琼脂平板或胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）。

　　3、生化试验试剂：氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、糖、脲酶和伯胶糖等，均购自长沙金标生物有限公司。

　　4、药敏试纸：氟苯尼考、泰妙菌素、头孢菌素、丁胺卡那霉素、氟甲砜霉素、头孢噻肟、红霉素、克林霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素、土霉素, 均购自长沙金标生物有限公司。

二、方法及结果

　　1、病理变化观察

　　剖检病死猪，发现胸腔内有大量淡红色液体、纤维性渗出物。肺脏呈纤维素性胸膜肺炎， 肺肿大暗紫红色，表面覆有纤维素性渗出物。支气管内有淡红色泡沫样渗出物。心包积液。腹腔内有大量透明黄褐色渗出液， 有的呈胶胨状凝块。全身淋巴结肿大，暗红色。

　　2、触片镜检

　　取发病猪的肺组织、心血、胸水和腹膜面涂片，革兰氏染色，镜检可见革兰氏阴性的细小杆菌，个别两极球杆状革兰氏阴性菌。

　　3、细菌分离培养

　　无菌取发病猪的肺脏、腹膜、胸水和心血划线接种TSA平板，置37℃，5%CO2培养箱培养48h，出现无色、透明、湿润、光滑、边缘整齐的针头大小菌落，镜检可见大小不一、形态有细长、丝状的革兰氏阴性杆菌。接种无NAD的TSA不生长。而后挑取单个菌落，再进行纯培养。

　　4、生化试验

　　挑取纯化菌落接种于氧化酶、甘露醇、吲哚、葡萄糖、半乳糖、果糖、蔗糖、核糖、脲酶和伯胶糖等生化鉴定管中，同时加入0.01%的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）5微升，置于37℃5%的CO2 培养箱培养48h，观察结果如下：

　　5、药敏试验

　　将细菌TSA纯培养物，吸取200微升均匀涂布于TSA平板上，纸片法进行药敏试验，置37℃5%的CO2培养箱中培养48h，测量抑菌环直径并判定结果。该菌对氟苯尼考、泰妙菌素、氟甲砜霉素、头孢菌素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟高敏，对红霉素、克林霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素、土霉素低敏。

三、讨论与防治建议：

　　当前猪场普遍滥用抗生素使得副猪嗜血杆菌在病料中分离率比较低，要求患猪未使用抗生素治疗并且在剖杀后6**内进行细菌分离。而且该菌对营养要求苛刻，在巧克力培养基上培养48h生长也较差。一般该菌的分离应采用含NAD、酵母浸出液和10%马血清的TSA培养基。

　　1、 保健措施：

　　仔猪在断奶前一周和断奶后三周的每吨饮水中混入九鼎鼎诸康0.25公斤。生长肥育猪每吨配合饲料中使用0.125公斤九鼎泰妙净。鼎诸康和泰妙净的主要成分就是我们实验结果得出的两种高敏药物分别是氟苯尼考和泰妙菌素。

　　2、 加强日常管理、必要时做好免疫：

　　加强日常管理，做好环境卫生的消毒工作对预防细菌病有重要意义。一般猪场无本病发生时，要做好药物保健措施，不建议免苗。在本病常发场，建议使用正规厂家的疫苗做好免疫程序。

　　3、治疗：发病猪只用氟苯尼考注射液肌注2mg/kg一天一次。